产品目录

形态学检测是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化是多阶段的，起初，细胞间连接和微绒毛消失，细胞体积缩小，胞浆凝缩，内质网变疏松并与胞膜融合，形成一个个空泡，核糖体与线粒体等细胞器聚集，结构尚无明显改变，细胞核内的染色质逐渐凝聚成新月状附在核膜周边，细胞核固缩呈均一的致密物，进而断裂成碎块，此时细胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不断出芽、脱落，一个细胞变成数个大小不等的有膜包裹的凋亡小体：最后凋亡小体被周围具有吞噬能力的细胞吞噬、消化。上述这些形态学的变化，可以通过本试剂盒中的染色及光学显微镜观察。

1. 利用血球计数板进行该项操作时，不要用血计板配套的质地较硬的盖玻片，而用普通的盖玻片反而更利于结果的观察。
   
2. Dye Reagent 2使用前，用Buffer A稀释10倍后染色。

1. 用适当的方法诱导细胞凋亡，消化收集细胞；
   
2. 用PBS洗涤细胞二次，并调成浓度为1×10⁶cells/ml细胞悬液；
   
3. 吸取50～100μL的细胞悬液均匀涂布于载玻片(A片)上或用离心涂片机制片，室温晾干，甲醇固定5min；
   
4. 在A片上滴加数滴100μL的Dyes Reagent 1室温染色1min，用水轻轻洗去染液；
   
5. 在含体积分数为1%盐酸的80%乙醇中分化10 s，流水冲洗1min，晾干，显微镜下观察细胞的形态。
   
6. 在另一张涂有细胞并已于无水乙醇固定2min的载玻片(B片)上滴加100μL染色液2(Dyes Reagent 2：Buffer A=1:9的混合液)，室温染色5～20min，用水轻轻洗去染液，室温晾干；
   
7. 二甲苯浸泡3min，以去除杂质，使载玻片透明，最后树脂封片，显微镜下观察细胞形态；
   
8. 观察200～500个细胞，计数凋亡细胞所占的比例。

1. A片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。染色质凝聚，嗜碱性增强，染成深蓝色，呈环状或新月状附在核膜周围，或细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒，核膜消失。而坏死细胞体积增大，染色质变稀疏成网状，嗜碱性减低，染成淡蓝色，胞核破碎，细胞膜不完整。
   
2. B片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。胞浆稀少或缺乏，染成淡红色，染色质凝聚，染成深紫色，细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。
   
3. 计算细胞凋亡率和死亡率：
   细胞凋亡率=凋亡细胞/细胞总数×100%
   细胞死亡率=坏死细胞/细胞总数×100%